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津騰

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津騰濾器在測定蓮子中黃曲霉毒素B1的作用

導(dǎo)讀:天津津騰調(diào)查了解到目前，以適配體為識別元件的親和柱已被用于血液、啤酒和花生中小分子目標(biāo)物的前處理，如可卡因、赭曲霉毒素A(Ochratoxin，OTA)等。然而，用于富集凈化中藥材中


返回列表 來源：未知 發(fā)布日期：2020-05-14 14:54【大 中 小】
天津津騰調(diào)查了解到目前，以適配體為識別元件的親和柱已被用于血液、啤酒和花生中小分子目標(biāo)物的前處理，如可卡因、赭曲霉毒素A(Ochratoxin，OTA)等。然而，用于富集凈化中藥材中AFB1的AAC還未見報道。本研究以無毒的N-羥基硫代琥珀酰亞胺活化的瓊脂糖替代傳統(tǒng)親和柱中使用的高毒性溴化氰活化的瓊脂糖作為固相載體，制備了AFB1-AAC。對AFB1-AAC的柱容量、準(zhǔn)確性、重復(fù)性和特異性等性能進(jìn)行評價，并與AFB1-IAC的凈化效果進(jìn)行比較。將優(yōu)化后的AAC用于蓮子樣品中AFB1的凈化富集，并利用高效液相色譜-光化學(xué)衍生熒光檢測法(HPLC-PCD-FCD)進(jìn)行分析檢測。

1儀器與試劑
1260系列高效液相色譜-熒光檢測器(美國安捷倫公司);0.2μm針筒式濾膜過濾器(天津津騰實驗設(shè)備有限公司);玻璃纖維濾紙(110mm，1.5μm，青島普瑞邦生物工程有限公司);DHM200渦旋振蕩器(寧波洛尚智能科技有限公司);FE28pH計(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);GmbH臺式冷凍離心機(jī)(德國Sigma離心機(jī)有限公司);光化學(xué)衍生器(北京華安麥科生物技術(shù)有限公司);固相萃取柱管(1mL帶凸緣柱管，天津艾杰爾飛諾美公司);黃曲霉毒素B1免疫親和柱(康源泰博生物科技有限公司)。

2AFB1-AAC的操作流程
將AFB1標(biāo)準(zhǔn)品溶液加樣至AAC，依次經(jīng)過淋洗和洗脫，用HPLC檢測洗脫液中AFB1，計算回收率，以篩選AAC的富集凈化的最佳條件。首先，用5mL結(jié)合緩沖液將AAC活化;然后，將30mLAFB1標(biāo)準(zhǔn)品溶液上樣至AAC中，以1mL結(jié)合緩沖液淋洗，1mL甲醇洗脫。洗脫液于40℃氮吹至近干，用1mL液相色譜流動相復(fù)溶，過0.2μm津騰針筒式濾膜，用HPLC-PCD-FLD檢測。

3樣品處理
準(zhǔn)確稱取5g蓮子樣品(精確至0.01g)和1gNaCl，加入25mL甲醇-水(70∶30，V/V)進(jìn)行提取，使用渦旋振蕩器，以2500r/min振蕩20min后，10000r/min離心10min。每管中取5mL上清液，稀釋至50mL，用玻璃纖維濾紙過濾，取續(xù)濾液，備用。以5mL結(jié)合緩沖液活化AAC后，準(zhǔn)確移取續(xù)濾液30mL上樣至AAC，1mL結(jié)合緩沖液淋洗，將2～3mL空氣通過AAC，1mL甲醇洗脫，收集的洗脫液在40℃氮吹至近干，用1mL液相流動相復(fù)溶，過0.2μm津騰針筒式濾膜，轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶后，用HPLC-PCD-FLD檢測。

4結(jié)論
核酸適配體具有體外合成、易修飾、批次差異小和便于儲存等優(yōu)點，天津津騰實驗設(shè)備有限公司了解到本研究通過將氨基修飾的適配體與NHS活化的瓊脂糖共價偶合，制備了一種富集凈化AFB1的AAC。優(yōu)化了載樣液中有機(jī)溶劑含量、載樣液的體積和淋洗體積等實驗參數(shù)，制備了對蓮子中AFB1有較好的凈化效果的AAC，柱容量達(dá)到(334.6±18.2)ng，對蓮子加標(biāo)樣品中AFB1分析的平均回收率為100.6%，且具有較好的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性。對AFB1-AAC與AFB1-IAC的性能進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，AFB1-AAC與AFB1-IAC有相似的凈化效果，但AAC可重復(fù)使用達(dá)20次，且具有很好的重復(fù)性。未來希望能通過對固相材料的挖掘，開發(fā)以適配體為識別元件的價格更低廉、操作更簡便的AAC，為痕量污染物前處理方法提供實用高效的解決方案。



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