平皿傾注法加菌操作微生物計(jì)數(shù)方法的關(guān)鍵仍然是用天津津騰生產(chǎn)的微生物限定度做加菌回收試驗(yàn)。平皿傾注法的加菌回收試驗(yàn)操作比較統(tǒng)一,一般是將制備好的供試品溶液,按照每管10mL分裝好,加入含菌量為3000~10000cfu·mL-1的菌液100μL,混勻,注皿。
薄膜過(guò)濾法加菌操作薄膜過(guò)濾法的加菌操作仍存在較大差異。滕鈺等對(duì)重樓解毒酊、苗藥傷科止痛液、傷痛克酊、爐甘石氧化鋅洗劑等樣品的薄膜過(guò)濾采用的是前加菌方式:?。?/font>∶10供試液10mL,加入100μL菌液,混勻,再?。保埃恚袒颍保恚坦┰囈哼^(guò)濾,然后再?zèng)_洗。
鄢雷娜等對(duì)爐甘石粉原料藥、芪連降糖片、替硝唑栓、神農(nóng)蛇藥酒等樣品的薄膜過(guò)濾法采用的是后加菌方式:在最后100mL沖洗液中加菌。
龐云娟等和劉康連等關(guān)于薄膜過(guò)濾研究的加菌方式是在濾杯中先加入約20mL稀釋液潤(rùn)濕濾膜,再加入1∶10供試液10mL或1mL,再緩慢地把菌液1mL(不大于100cfu)分散打進(jìn)薄膜過(guò)濾杯中,抽濾,再?zèng)_洗。
由于加菌操作不同,方法的結(jié)論差異較大。目前的文獻(xiàn)以前加菌和后加菌的占比最多,前加菌的方式導(dǎo)致菌株與供試品溶液提前接觸、可能在上樣到薄膜過(guò)濾器的時(shí)候大部分菌已被抑制死,后續(xù)的沖洗無(wú)法體現(xiàn)出不同沖洗量對(duì)抑菌作用消減的差異;而后加菌的方式,所加進(jìn)去的菌沒(méi)有參與沖洗的過(guò)程。
關(guān)于薄膜過(guò)濾法的加菌操作應(yīng)滿足以下2點(diǎn)要求:(1)菌液避免與供試品原液或其1∶10供試液的液體成分提前接觸;(2)加進(jìn)去的菌要參與沖洗的試驗(yàn)過(guò)程。可見(jiàn)在第1次沖洗液中加菌的方式相對(duì)合理。