免疫球蛋白G是血清主要的抗體成分,結(jié)構(gòu)由抗原結(jié)合片段和可結(jié)晶片段組成。其中Fab片段保留了抗體完整的抗原結(jié)合部位及互補(bǔ)決定區(qū)，在臨床診斷治療、免疫分析檢測(cè)和生命科學(xué)基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域，以其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，分子量小，免疫原性低，不與Fc受體結(jié)合、組織滲透力高等優(yōu)點(diǎn)越來(lái)越受到重視，被認(rèn)為有取代完整抗體的潛質(zhì)。
本研究前期獲得一株抗水體污染物MC-LR抗體，其Fab片段與凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)存在非常強(qiáng)烈的非特異性結(jié)合，無(wú)法流穿。在此基礎(chǔ)上利用凝膠過(guò)濾層析柱通過(guò)改變流動(dòng)相條件一步純化Fab片段，在不同離子強(qiáng)度和pH的流動(dòng)相中，通過(guò)考察Fab片段在凝膠過(guò)濾層析柱上的吸附選擇性，結(jié)合Fab片段本身性質(zhì)對(duì)二者的吸附機(jī)制進(jìn)行探討，以期為Fab片段高效純化方法的開發(fā)提供一種新的思路，同時(shí)為蛋白純化提供一些理論參考。
通過(guò)凝膠過(guò)濾層析建立了酶解混合物中微囊藻毒素Fab片段的一步純化方法。所制備的Fab片段純度大于90%，對(duì) MC-LR抑制率達(dá)94%，F(xiàn)ab片段回收率為51%。在含有100mmol/LNaCl和不含NaCl，pH7.4和pH9.0相互組合的四個(gè)20mmol/L Tris 緩沖液分別作為流動(dòng)相時(shí)，只有pH9.0、不含NaCl的20mmol/LTris 可以使Fab片段在48mL正常流穿。結(jié)合Fab片段pI 6.03，易產(chǎn)生聚集且1%SDS 溶液可以使其解聚的性質(zhì)，初步分析是由于Fab片段具有較強(qiáng)的表面疏水性而與S-75填料產(chǎn)生疏水吸附，流動(dòng)相中低離子強(qiáng)度及遠(yuǎn)高于蛋白pI的pH可以影響疏水與離子排阻作用而使Fab片段消除吸附。Fab片段與S-75結(jié)合的現(xiàn)象及純化方法為疏水性Fab片段今后在凝膠過(guò)濾層析上實(shí)現(xiàn)新的純化模式提供參考。
