微菌落技術(shù)用細(xì)菌快速定量檢測(cè)的研究報(bào)告較多,我們?cè)谘芯课⒕浼夹g(shù)用于多種食品細(xì)菌總數(shù)測(cè)定中,發(fā)現(xiàn)不同性質(zhì)或品牌微孔濾膜對(duì)細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定結(jié)果有較大影響。為此,我們選擇了不同性質(zhì)的微孔濾膜對(duì)細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的影響因素進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)比較, 以求獲得較佳的微孔濾膜。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 微孔濾膜
1.1.2 聚醚砜微孔濾膜孔徑﹤0.45μm, 直徑47mm, 美國(guó)Pall公司生產(chǎn)。
1.1.3 混合纖維素濾膜、醋酸纖維素濾膜。
1.1.4 培養(yǎng)基及染色液營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、染色液均, 效期內(nèi)使用。
1.1.5 抽濾系統(tǒng)AutoScience 。
1.1.6 多媒體彩顯顯微診斷儀XS-2100日本產(chǎn), 。
1.1.7 標(biāo)準(zhǔn)菌株 大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌。
1.1.8 固定液 本實(shí)驗(yàn)室自制,按比例進(jìn)行,乙醇:冰醋酸=91。
1.1.9 食品標(biāo)本 隨機(jī)抽取市售的食品10份( 編號(hào)1～2飲料;3～4糕點(diǎn);5～6牛奶;7～8豆制品;9～10肉制品) 。
1.2 方法
1.2.1 不同微孔濾膜對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的重復(fù)性試驗(yàn) 將大腸埃希氏菌制備成1.5×102cfu/ml濃度, 用3種微孔濾膜與國(guó)標(biāo)營(yíng)養(yǎng)瓊脂法重復(fù)測(cè)定5次。
1.2.2 回收試驗(yàn) 將大腸埃希氏菌ATCC8099、金黃色葡萄球菌ATCC6538分別制成5種不同濃度的細(xì)菌懸液加入同一食品用3種濾膜分別測(cè)定其每ml中的cfu。
1.2.3 不同食品標(biāo)本比對(duì)試驗(yàn) 取市售食品10份(飲料2份;糕點(diǎn)2份;牛奶2份;豆制品2份;肉制品2份) 。分別用3種濾膜測(cè)定其cfu,用國(guó)標(biāo)法比對(duì)。
1.2.4 濾膜透明固定處理后的復(fù)性觀察 將混合纖維素濾膜與醋酸纖維素濾膜用透明固定液處理1min后觀察其復(fù)性狀況。
2 結(jié)果
2.1 3種微孔濾膜法對(duì)大腸埃希氏菌重復(fù)試驗(yàn)3種微孔濾膜對(duì)相同濃度的大腸埃希氏菌的測(cè)定, 具有很好的重復(fù)性。
2.2 不同的微孔濾膜對(duì)大腸埃希氏菌和金葡菌的回收率3種不同濾膜對(duì)大腸埃希氏菌和金葡菌的回收率均在95%～105%之間,3者之間無(wú)差異, 符合實(shí)驗(yàn)要求。
2.3 3種微孔濾膜與國(guó)標(biāo)法測(cè)定食品中細(xì)菌總數(shù)的結(jié)果將市售的5類10份食品中分別用3種濾膜與國(guó)標(biāo)法平行測(cè)定其細(xì)菌總數(shù), 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,3種濾膜測(cè)定的結(jié)果與國(guó)標(biāo)法結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 。
2.4 透明固定液處理后的濾膜復(fù)性聚醚砜微孔濾膜為進(jìn)口單獨(dú)滅菌包裝不需作透明處理, 將混合纖維素濾膜, 醋酸纖維素濾膜用透明處理后, 混合纖維素濾膜不易復(fù)性, 透明, 清晰, 觀察結(jié)果方便, 而醋酸纖維素濾膜處理后清晰度較好, 但易于復(fù)性, 對(duì)結(jié)果觀察有些影響。
3 討論
食品中細(xì)菌總數(shù)微菌落多媒體快速檢測(cè)技術(shù)的研究, 對(duì)強(qiáng)化食品安全工作意義十分重要, 有利于快速鑒定食品的安全性, 但微菌落技術(shù)的主要關(guān)鍵是結(jié)果是否準(zhǔn)確, 而濾膜的性能與質(zhì)量將直接影響其檢測(cè)結(jié)果, 本次試驗(yàn)表, 聚醚砜微孔濾膜
為進(jìn)口單獨(dú)滅菌包裝, 性能與檢測(cè)結(jié)果具有不需作透明處理,易于觀察等優(yōu)點(diǎn), 且結(jié)果與國(guó)標(biāo)法基本一致, 而且操作簡(jiǎn)便,是微菌落技術(shù)首選濾膜, 但價(jià)格較貴, 成本較高, 有條件的單位可選用之, 混合纖維素濾膜和醋酸纖維素濾膜在試驗(yàn)時(shí)其結(jié)
果雖與國(guó)標(biāo)法結(jié)果無(wú)明顯差異, 但醋酸纖維素濾膜經(jīng)透明處理易于復(fù)性, 觀察結(jié)果時(shí)有較明顯影響, 混合纖維素濾膜則不易復(fù)性, 加熱固定易于菌體結(jié)合, 透明度和清晰度與聚醚砜微孔濾膜相似, 而且混合纖維素濾膜是國(guó)產(chǎn), 價(jià)格較低, 是基層實(shí)驗(yàn)室較佳的選擇。
