不同濾膜過濾人免疫球蛋白效果的影響
導(dǎo)讀:本文天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司比較不同種類預(yù)過濾膜對(duì)納米膜過濾人免疫球蛋白效果的影響。
來源：未知
發(fā)布日期：2019-12-25 09:59【大 中 小】
本研究天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司選擇不同預(yù)過濾膜與納米膜過濾IgG，探討其對(duì)蛋白回收率及通量的影響，并進(jìn)行去除豬細(xì)小病毒過濾驗(yàn)證，為規(guī)?；a(chǎn)中納米膜的選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1.納米膜通量篩選試驗(yàn)
A、B、C廠的預(yù)過濾膜分別與本廠的納米膜連接，分別加入20mL的緩沖液（250mmol轅L甘氨酸，pH3.93），將壓力調(diào)至3.0bar，保持10min，檢測(cè)緩沖液的濾速后，排空上游水，并將下游出口浸沒于水中，系統(tǒng)加壓至6bar，檢測(cè)系統(tǒng)及膜完整性。檢測(cè)合格后卸去壓力，排空上游緩沖液，進(jìn)行通量篩選試驗(yàn)。將1000mL樣品分別過濾一定時(shí)間，比較預(yù)過濾膜的過濾效果。
2.納米膜過濾去除病毒驗(yàn)證
將篩選的預(yù)過濾膜依次過濾注射用水及緩沖液各200mL；1000mL樣品中加入1%PPV原液，混均后取樣（放室溫20h后凍存于-30益），分別進(jìn)行預(yù)過濾后再進(jìn)行納米膜過濾；當(dāng)下游出現(xiàn)第1滴納濾樣品時(shí)開始計(jì)時(shí)并稱重，前15min，每1min記錄1次，之后每5min記錄1次至60min，每10min記錄1次至120min，每30min記錄1次至濾速降低到開始濾速的1%，終止過濾。每濾出10mL記為1個(gè)樣品（放室溫20h后于-30益凍存?zhèn)溆茫?，稱重法確定濾出液質(zhì)量并計(jì)算速率。
3.討論
本實(shí)驗(yàn)用的IgG濃度為53g轅L，蛋白濃度較高，對(duì)于孔徑為20nm的納米膜去除病毒的作用有較大的挑戰(zhàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B廠的納米膜過濾通量?jī)?yōu)于A廠，2個(gè)廠家約1200min的過濾通量分別為3.74和2.39L轅（m2·h），對(duì)指示病毒PPV的去除效果分別為逸4.25和逸4.63LgTCID50轅0.1mL，蛋白回收率均在96%以上，表明納米膜過濾基本上不影響蛋白的回收率。天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司通過本次實(shí)驗(yàn)，為今后的規(guī)?；a(chǎn)中納米膜的選擇提供了依據(jù)。雖然納米膜有良好的病毒去除能力，但不能作為單獨(dú)的病毒滅活轅去除步驟使用。為確保制品安全，生產(chǎn)工藝中需采用多種不同機(jī)制的方法聯(lián)用，如結(jié)合S轅D、pH4、巴氏等技術(shù)以提高病毒安全性。作為一種強(qiáng)有力的病毒去除方法，納米膜過濾已經(jīng)被證明不會(huì)引起蛋白的改變，根據(jù)膜截留量和蛋白相對(duì)分子質(zhì)量大小選擇適當(dāng)孔徑的納米膜進(jìn)行過濾，蛋白質(zhì)回收率較高。納米膜結(jié)合其他已經(jīng)得到認(rèn)可的病毒滅活方法的使用，具有針對(duì)性強(qiáng)、實(shí)用性廣、毒性小、下游污染少及蛋白活性高且回收率高等優(yōu)點(diǎn)，為制備更安全的血液制品做出了巨大的貢獻(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)表明，預(yù)過濾膜對(duì)納米膜過濾的影響較大，直接影響過濾通量、衰減率及蛋白質(zhì)的回收率，預(yù)過濾膜的篩選可為后續(xù)的除病毒過濾驗(yàn)證提供幫助。
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