微孔濾膜在咖啡堿的快速測(cè)定中的作用
導(dǎo)讀:本文天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司建立基于鈦膠反相色譜固定相快速測(cè)定食品中可可堿、茶堿和咖啡堿的高效液相色譜法。同時(shí)淺談了微孔濾膜在其快速測(cè)定中的作用。
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發(fā)布日期：2019-11-12 10:37【大 中 小】
本實(shí)驗(yàn)天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司采用鈦膠基質(zhì)色譜固定相建立的反相HPLC可同時(shí)分離，分析結(jié)構(gòu)相似的3種生物堿——可可堿、茶堿和咖啡堿，該法流動(dòng)相成分簡(jiǎn)單且不含鹽，僅為5%甲醇溶液，且采用等度洗脫，檢測(cè)效率高、分離靈敏度高、檢出限低、穩(wěn)定性好。將此法應(yīng)用于6種飲料樣品中可可堿、茶堿和咖啡堿的測(cè)定，在重復(fù)性、回收率等方面均表現(xiàn)優(yōu)異，結(jié)果令人滿意。另外，本實(shí)驗(yàn)天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司也研究了3種生物堿保留的熵、焓和吉布斯自由能，從熱力學(xué)的角度探討3種生物堿在HPLC上的保留行為。
1材料與試劑
可可堿標(biāo)準(zhǔn)品（99%）、茶堿標(biāo)準(zhǔn)品（99%）、咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)品（99%）上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜級(jí)）美國(guó)Sigma公司；微孔濾膜（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）6種飲料樣品市購(gòu)。
2儀器與設(shè)備
1200系列HPLC儀美國(guó)安捷倫公司；SachtoporeRP色譜柱（250mm×4.6mm，5μm，300Å）美國(guó)Zirchrom公司；Lambda25紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)珀金埃爾默儀器有限公司；離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；萬(wàn)分之一天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。
3方法
3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
1.0mg/mL可可堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1000g可可堿標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解并定容至100mL容量瓶中；2.0mg/mL茶堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1000g茶堿標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解并定容至50mL容量瓶中；3.0mg/mL咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1500g咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解并定容至50mL容量瓶中，以上各儲(chǔ)備液均置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br />
3.2樣品處理
飲料樣品：準(zhǔn)確量取5mL已提前超聲脫氣20min的樣品，稀釋2倍，過(guò)0.45mm津騰微孔濾膜，進(jìn)行HPLC分析。固體飲料樣品：準(zhǔn)確稱取0.5000g樣品，加水溶解并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中定容，在60℃條件下采用超聲波提取30min，隨后在4000r/min條件下離心10min，上清液過(guò)0.45mm微孔濾膜，進(jìn)行HPLC分析。
3.3色譜條件
流動(dòng)相為水-甲醇（95∶5，V/V），等梯度洗脫；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量20mL；檢測(cè)波長(zhǎng)273nm；柱溫60℃。
4結(jié)論
鈦膠基質(zhì)色譜固定相在天然甲基嘌呤類生物堿如可可堿、茶堿和咖啡堿的快速、同時(shí)分析檢測(cè)中展現(xiàn)出了優(yōu)異的色譜性能，檢測(cè)結(jié)果顯示色譜峰峰形較好，可達(dá)到理想的測(cè)定效果，且其在線性范圍、檢出限以及加標(biāo)回收率等方面均可達(dá)到分析要求。此外，HPLC條件（尤其是流動(dòng)相）在較大程度上影響化合物的分離，流動(dòng)相的試劑種類、梯度比例以及酸溶液的種類和濃度均可影響分離效果。在本實(shí)驗(yàn)天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司提出的色譜條件中，流動(dòng)相中甲醇的比例僅占5%，無(wú)需添加任何緩沖鹽，采用等度洗脫簡(jiǎn)便、快速。同時(shí)，可以避免堿性物質(zhì)的不可逆吸附以及色譜柱的壽命隨使用而快速縮短等弊端，充分體現(xiàn)了綠色高效、保護(hù)環(huán)境、節(jié)約資源等優(yōu)點(diǎn)，適于推廣普及。
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