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微孔濾膜在高效液相色譜法檢測(cè)酸奶中的應(yīng)用

導(dǎo)讀:建立了高效液相色譜-熒光檢測(cè)器（HPLC-FLD）測(cè)定酸奶中唾液酸含量的分析方法。該方法為：使用1moL/L甲酸80℃下水解樣品2h，以4，5-亞甲二氧基-1，2-鄰苯二銨鹽（DMB）為衍生化試劑，在


返回列表 來(lái)源：未知 發(fā)布日期：2020-06-05 15:15【大 中 小】
目前，SA含量檢測(cè)方法有很多，如薄層層析法、分光光度計(jì)法、高效液相色譜法以及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。其中，比色法和高效液相-紫外檢測(cè)法使用尤為常見(jiàn)。但是這兩種方法特異性差，由于乳糖在SA最大吸收波長(zhǎng)處也有吸收，對(duì)SA檢測(cè)有干擾導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度不高，不適于酸奶中SA的檢測(cè)。天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司了解到本文利用衍生化試劑（DMB）與SA的α-酮酸類結(jié)構(gòu)產(chǎn)生特異性反應(yīng)，以達(dá)到高特異性，消除乳糖對(duì)檢測(cè)的干擾。通過(guò)優(yōu)化水解和衍生化條件利用液相-熒光色譜法建立了一種簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高的酸奶中SA含量的測(cè)定方法。該方法可有效提高檢測(cè)精度，避免酸奶中各種雜質(zhì)干擾，同時(shí)靈敏度較高，可以滿足酸奶及奶制品中SA含量檢測(cè)的要求，并為相關(guān)研究提供技術(shù)支持。

1材料與方法
1.1材料與試劑
N-乙酰神經(jīng)氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（阿拉?。皇惺鬯崮?；甲醇、甲酸、乙酸（色譜純）；DMB試劑、低亞硫酸鈉、2-巰基乙醇（分析純）；0.22μm天津津騰微孔濾膜；超純水。

1.2儀器與設(shè)備
高效液相色譜儀，配熒光檢測(cè)器UltiMate3000：美國(guó)Thermo公司；色譜柱，ZorbaxSB-Aq（4.6×50mm，3.5-Micron）：美國(guó)Agilent公司；高速冷凍干燥離心機(jī)，3-18K：德國(guó)Sigma公司；智能數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-2：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；分析天平，XS105：瑞士MettlerToledo公司。

1.3試驗(yàn)方法與條件
1.3.1試驗(yàn)方法
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：精確稱取唾液酸標(biāo)準(zhǔn)品100mg于100mL容量瓶中，超純水溶解并定容。天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司了解到使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配成0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。樣品前處理：稱取1g（精確至0.0001g，大約含100～500µgSA）酸奶于100mL容量瓶中，加水至刻度處（使用溫水進(jìn)行溶解，需保證樣品完全溶解）。取500µl的酸奶樣品溶液與相同體積的甲酸（1mol/L）混合，在80℃下水解2h。水解后冰浴冷卻，在15000rap/min下離心10min。取200µL離心后的上清水解產(chǎn)物和相同體積的DMB溶液混合，在80℃下加熱50min。衍生后的樣品冰浴冷卻，再加入400µL水使之稀釋?；靹蚝蠼?jīng)0.22μm天津津騰微孔濾膜過(guò)濾，供液相分析。

2.結(jié)論
天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司了解到利用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法，通過(guò)優(yōu)化過(guò)程中水解和衍生化條件，建立酸奶中唾液酸的含量檢測(cè)方法。結(jié)果表明：使用1mol/L甲酸80℃下水解樣品2h，與7mmol/L的DMB在80℃下衍生化50min，酸奶中唾液酸得到最大釋放量，由外標(biāo)法定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2=0.9998，酸奶中唾液酸檢出限達(dá)到0.2mg/L。該方法能克服酸奶中各種雜質(zhì)干擾等問(wèn)題，具有重復(fù)性好、精密度高、回收率高、低檢出限、易操作等優(yōu)點(diǎn)，能準(zhǔn)確地檢測(cè)酸奶制品中唾液酸的含量。同時(shí)，該方法可以廣泛用于奶制品中唾液酸含量的檢測(cè)，具有很好的應(yīng)用前景。


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