微孔濾膜截留處理方法及原理
導讀:本文天津津騰實驗設備有限公司在開發(fā)空間細胞樣品自動處理方面做了探索性研究，建立了以微孔濾膜截留細胞后進行處理的方法，設計了以多位閥為核心的多流路切換系統(tǒng)，進行了關
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發(fā)布日期：2020-01-15 10:27【大 中 小】
本文天津津騰實驗設備有限公司主要介紹了基于微孔濾膜截留的細胞樣品處理方法及原理，從理論上進行了可行性分析，利用微孔濾膜截留細胞，實現(xiàn)其與培養(yǎng)基的分離，并在膜表面進行原位裂解與標記。設計了以多位閥為核心的多流路切換系統(tǒng)，結(jié)合微型隔膜泵驅(qū)動不同試劑流過細胞表面，從而實現(xiàn)系統(tǒng)功能，形成了一套可以自主控制的原理樣機，并進行了功能驗證。
1實驗材料
微孔濾膜：天津津騰實驗設備有限公司；孔徑5μm，直徑20mm，醋酸纖維素、混合纖維素、尼龍、玻璃纖維和聚丙烯濾器；北京北化黎明膜分離技術有限責任公司；直徑25mm；特氟龍管；北京捷安杰科技發(fā)展有限公司；內(nèi)徑0.03英寸，外徑1/8英寸；小型隔膜泵；上海協(xié)升商貿(mào)有限公司；P200-LIQ-12V多位閥；北京捷安杰科技發(fā)展有限公司；
2.微孔濾膜截留細胞后清洗及細胞內(nèi)蛋白提取
(1)細胞清洗：培養(yǎng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞至對數(shù)生長期時收獲，胰蛋白酶消化后加入新鮮培養(yǎng)基吹打懸浮。抽取適當體積上述細胞懸浮液并通過5μm微孔濾膜，將細胞截留在膜表面。在室溫下，以低流速向濾器中通入生理鹽水，清洗至濾液無色透明。
(2)細胞內(nèi)蛋白提?。喝?mLRIPA裂解液使其充滿濾器，裂解膜表面截留的細胞，孵育30min，轉(zhuǎn)移到離心管中，得到蛋白提取液。
3FITC衍生化甘氨酸液相色譜分析條件
本文天津津騰實驗設備有限公司使用HPLC與本實驗室自制的LED誘導熒光檢測器聯(lián)用，檢測FITC衍生化的甘氨酸并記錄衍生物色譜峰，液相色譜分析條件為：RIGOLL-3000高效液相色譜系統(tǒng)，DiamonsilC18反相色譜柱，進樣量為20μL，流動相為甲醇：硼酸緩沖液（pH值9.37）=30:70，在每次試驗完成后調(diào)整流動相比例為80%甲醇將未洗脫的FITC沖出再進行下一次分析。由于FITC與氨基酸必須在高濃度下反應才能得到較高的收率，在進行高效液相色譜分析前，需要對樣品進行適當稀釋，用0.22μm濾膜過濾后再進樣分析。
