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津騰真空泵在檢測(cè)萬古霉素濃度方法中的應(yīng)用

導(dǎo)讀:本研究在采用HPLC測(cè)定萬古霉素血藥濃度的方法[16]的基礎(chǔ)上，對(duì)色譜條件和樣本前處理進(jìn)行優(yōu)化，以期能建立一種基于超高效液相色譜（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC）技術(shù)的快速、


返回列表 來源：未知 發(fā)布日期：2020-03-16 09:31【大 中 小】
本研究在采用HPLC測(cè)定萬古霉素血藥濃度的方法[16]的基礎(chǔ)上，對(duì)色譜條件和樣本前處理進(jìn)行優(yōu)化，以期能建立一種基于超高效液相色譜（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC）技術(shù)的快速、準(zhǔn)確、靈敏的更適合臨床常規(guī)TDM的方法，為降低藥物檢測(cè)及治療成本，指導(dǎo)臨床合理使用萬古霉素提供理論參考。

1儀器與試劑
SHIMADZULC-30A高效液相色譜儀（日本島津公司）、PhenomenexKinetexC18色譜柱（2.6μm，100mm×2.1mm）、XS205DU型分析天平（瑞士METTLERTOLEDO公司）、MultiReax漩渦混合器（德國Heidolph公司）、Eppendorf5427R高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司）、SevenMultiS40K型pH計(jì)（德國梅特勒-托利多有限公司）、Eppendorf移液器（德國EppendorfAG公司）、無油隔膜真空泵（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、T-50型溶劑過濾器（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、容量瓶（日本ASone公司）、Milli-Q超純水系統(tǒng)（德國Millipore公司）。

2流動(dòng)相配制
精密稱取磷酸二氫鉀3.4g，加入1000mLMilli-Q水中，置于電動(dòng)攪拌器上，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.5，配制成25mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液，經(jīng)0.45μm津騰微孔濾膜抽濾。

3沉淀劑的配制
精密稱取8.63g七水合硫酸鋅，加水溶解并稀釋混勻，配制成0.3mol/L硫酸鋅溶液，4℃避光密封保存，作為沉淀劑。本研究結(jié)果顯示，UPLC檢測(cè)血清萬古霉素濃度的線性范圍為2.0～99.6μg/mL，定量限和檢測(cè)限分別為1.0和0.1μg/mL，靈敏度和線性范圍完全能夠滿足常規(guī)檢測(cè)的要求。精密度評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，UPLC檢測(cè)低、中、高濃度樣本的平均批內(nèi)CV分別為3.28%、2.21%、2.59%，批間CV分別為5.73%、2.75%、0.82%；3種濃度（2.0、19.9、79.6μg/mL）的加標(biāo)樣本平均加標(biāo)回收率分別為104.06%、99.80%、100.19%，中濃度樣本的攜帶污染率為0.57%，高濃度樣本的攜帶污染率為0.19%。UPLC與HPLC（比對(duì)方法）測(cè)定質(zhì)控樣本的結(jié)果差異不大，一致性較好；測(cè)定患者樣本的結(jié)果相關(guān)性良好，平均偏移為0.07%。

HPLC采用的是高比例的水相進(jìn)行等度洗脫，進(jìn)行樣本分析時(shí)未用高比例有機(jī)相沖洗色譜柱，長時(shí)間使用時(shí)樣本中的脂溶性物質(zhì)易污染色譜柱。的色譜分析時(shí)間（15min）比文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC（8min）長，但有利于保護(hù)色譜柱，且2個(gè)目標(biāo)峰在6min內(nèi)全部出峰，適用于批量檢測(cè)，文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC2個(gè)目標(biāo)峰在7.5min內(nèi)才完全出峰。uPLC前處理采用的是蛋白沉淀，方法快速、簡(jiǎn)便，而文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC采用的是液液萃取，需要在60℃條件下蒸干40min，操作較為繁雜、耗時(shí)。綜上所述，本研究建立的基于UPLC技術(shù)測(cè)定血清萬古霉素的方法具有重現(xiàn)性好、快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高和準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，可用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究和TDM，為臨床合理、安全用藥提供保障。



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