隔膜真空泵在泡沬病毒樣品制備中的作用
導(dǎo)讀:天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司在本文淺談了泡沫病毒樣品的制備及0.33A隔膜真空泵在其制備中的作用。
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發(fā)布日期：2019-11-05 13:42【大 中 小】
天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司在本文淺談了泡沫病毒樣品的制備及GM-0.33A隔膜真空泵在其制備中的作用。
隨著對(duì)泡沫病毒研究的不斷深入，目前已有大量實(shí)例運(yùn)用pfＶ載體進(jìn)行基因治療。研究者們根據(jù)泡沫病毒載體及其靶細(xì)胞的特點(diǎn)，采取各種可能的策略（物理法、化學(xué)法等），對(duì)有關(guān)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的各方面進(jìn)行探索和優(yōu)化，以提高基因轉(zhuǎn)移及表達(dá)效率，使具有可調(diào)控性的泡沫病毒載體更安全、更有效地應(yīng)用于基因治療。作為一個(gè)基因治療的載體，泡沫病毒滴度的測(cè)定是一個(gè)必須要解決的問(wèn)題，目前測(cè)定逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度的方法有很多，無(wú)論是從核酸、逆轉(zhuǎn)錄酶還是從感染效率方面來(lái)檢測(cè)病毒滴度都有人做過(guò)研究，但是以泡沫病毒為研究對(duì)象建立滴度檢測(cè)方法的研究較少，而且對(duì)以上三種方法進(jìn)行比較研究的則幾乎沒(méi)有報(bào)道。本研究天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司從核酸、逆轉(zhuǎn)錄酶以及感染效率三個(gè)水平進(jìn)行了檢測(cè)原型泡沫病毒滴度的比較研究，具有一定的創(chuàng)新性。
1儀器設(shè)備
生物安全柜（BCd-183YtS，蘇州安泰）、數(shù)顯恒溫水浴鍋（蘇州國(guó)華）、液氮罐（YdS-10-80，四川東亞）、倒置顯微鏡（Ｘd-101，南京光電）、C02鋼瓶（CELLL50，陽(yáng)光）、C02培養(yǎng)箱（BHC-1300IIa/B3，HEraEuS）、蠕動(dòng)泵（YZ1515，天津協(xié)達(dá)）、高壓蒸汽滅菌鍋（YＸQ-LS-50，博訊）、烘箱（101-1aB，泰斯特）、磁力攪拌器（MS20011，IＫa）、隔膜真空泵（GM-0.33II，天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、過(guò)濾器（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、超低溫冰箱（tHErMofISHErSCIEntIfIC）、電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）、離心機(jī)（5415d，EpPEndorf）、電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）、低速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）、、掌上離心機(jī)（其林貝爾）、臺(tái)式大離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）、5415r冷凍離心機(jī)（EpPEndrof）、5415d離心機(jī)（EpPEndrof）、-25℃冰箱（dW-YL270，中科美菱）
2原型泡沬病毒樣品濃縮
（1）將收集的病毒上清置于50ml圓底離心管中，配平，在4℃12000g條件下離心10min，然后用一次性0.45pMl過(guò)濾器對(duì)所得的上清進(jìn)行過(guò)濾，去除細(xì)胞碎片。
（2）將濾液與5×PEG8000＋Nacl按4:1的比例混合均勻，置于50min尖底離心管中，每20min混合一次，重復(fù)3-5次，4℃放置過(guò)夜。
（3）4℃4000g離心30min，小心地吸棄上清，倒置管子1-2min，使殘余液體流盡，這時(shí)可看到白色病毒沉淀，將離心管置于冰上。
（4）加入4ml溶液S，用移液器輕輕吹打使病毒粒子溶解，然后4℃3000rpMl離心5min，將所得病毒上清轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的Ep管中，此步驟旨在去除殘留的PEg8000。
（5）將病毒上清加入到15ml超濾管中，在4℃3000rpm條件下離心15min，得到濃縮后的原型泡沫病毒粒子，將其與腺病毒凍存培養(yǎng)基按1:1混勻，然后分裝在成品管中，放入細(xì)胞凍存盒于-80℃冰箱放置兩個(gè)小時(shí)后，從細(xì)胞凍存盒取出置于-80℃保存。
3結(jié)果
運(yùn)用PCR技術(shù)檢測(cè)原型泡沫病毒的gag基因，得到如下結(jié)果。天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司通過(guò)核酸水平的檢測(cè)結(jié)果可知，本研究成功制備了原型泡沫病毒。
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