天津津騰微孔濾膜在菌株生長研究中的應(yīng)用
1菌株
篩選出類芽孢桿菌，該菌株由鄭州輕工業(yè)大學(xué)食工學(xué)院生物催化與轉(zhuǎn)化研究室篩選，于-80℃冰箱甘油管保存?zhèn)溆?。挑取菌株劃線接種于種子培養(yǎng)基3的固體平板上，置于30℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，將平板保存在4℃冰箱備用。
2實(shí)驗(yàn)方法
2.1菌株生長培養(yǎng)及甾醇降解
將保藏于斜面培養(yǎng)基的類芽孢桿菌接種至種子培養(yǎng)基，在37℃，180rpm的搖床中活化培養(yǎng)48h。種子培養(yǎng)結(jié)束后，接入不同的發(fā)酵降解培養(yǎng)基中，以裝液量為50mL/250mL三角瓶，10%的接種量接種于37℃，180rpm搖床中進(jìn)行甾醇降解并測定生物量。
2.2生物量測定方法
微生物培養(yǎng)過程，每隔5-10h（根據(jù)生長情況）小時(shí)取樣一次，測定OD，并留樣2ml，經(jīng)處理后進(jìn)行液相檢測其中的甾醇含量，確定不同時(shí)間的甾醇降解率，并繪制微生物生長曲線和甾醇降解動(dòng)力學(xué)曲線。
2.3甾醇含量測定
取發(fā)酵后的樣品2ml，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取后，常溫下?lián)]發(fā)干，再用等體積甲醇復(fù)溶后，過0.22µm津騰微孔濾膜，再進(jìn)行相應(yīng)的高效液相檢測，采用ELSD檢測器，通過獲得的液相峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)的甾醇濃度。
3.小結(jié)
（1）從碳源、氮源、溫度、pH等方面對(duì)微生物生長及甾醇降解特性進(jìn)行了研究，獲得了類芽孢桿菌在純培養(yǎng)單因素試驗(yàn)下，可以降解2g/L的甾醇，降解率達(dá)到90.0%以上；同時(shí)也確定了其最合適的生長溫度（37℃）、pH（7.0）、碳源（葡萄糖6.0g/L）及氮源（酵母粉1.0g/L）濃度。
（2）通過單因素試驗(yàn)，系統(tǒng)研究溫度，pH，碳源，氮源，豆甾醇濃度對(duì)甾醇降解率的影響。利用Minitab軟件進(jìn)行了PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)，最陡爬坡試驗(yàn)和中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)（CCD），得出了最佳降解工藝組合溫度40℃，pH值為6.53，豆甾醇濃度為2.15g/L，葡萄糖濃度6g/L，酵母粉濃度1g/L。在此條件下進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，最終甾醇降解率的均值為97.28%，與預(yù)測值基本相符，因此經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化后的降解條件是可行的。
篩選出類芽孢桿菌，該菌株由鄭州輕工業(yè)大學(xué)食工學(xué)院生物催化與轉(zhuǎn)化研究室篩選，于-80℃冰箱甘油管保存?zhèn)溆?。挑取菌株劃線接種于種子培養(yǎng)基3的固體平板上，置于30℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，將平板保存在4℃冰箱備用。
2實(shí)驗(yàn)方法
2.1菌株生長培養(yǎng)及甾醇降解
將保藏于斜面培養(yǎng)基的類芽孢桿菌接種至種子培養(yǎng)基，在37℃，180rpm的搖床中活化培養(yǎng)48h。種子培養(yǎng)結(jié)束后，接入不同的發(fā)酵降解培養(yǎng)基中，以裝液量為50mL/250mL三角瓶，10%的接種量接種于37℃，180rpm搖床中進(jìn)行甾醇降解并測定生物量。
2.2生物量測定方法
微生物培養(yǎng)過程，每隔5-10h（根據(jù)生長情況）小時(shí)取樣一次，測定OD，并留樣2ml，經(jīng)處理后進(jìn)行液相檢測其中的甾醇含量，確定不同時(shí)間的甾醇降解率，并繪制微生物生長曲線和甾醇降解動(dòng)力學(xué)曲線。
2.3甾醇含量測定
取發(fā)酵后的樣品2ml，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取后，常溫下?lián)]發(fā)干，再用等體積甲醇復(fù)溶后，過0.22µm津騰微孔濾膜，再進(jìn)行相應(yīng)的高效液相檢測，采用ELSD檢測器，通過獲得的液相峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)的甾醇濃度。
3.小結(jié)
（1）從碳源、氮源、溫度、pH等方面對(duì)微生物生長及甾醇降解特性進(jìn)行了研究，獲得了類芽孢桿菌在純培養(yǎng)單因素試驗(yàn)下，可以降解2g/L的甾醇，降解率達(dá)到90.0%以上；同時(shí)也確定了其最合適的生長溫度（37℃）、pH（7.0）、碳源（葡萄糖6.0g/L）及氮源（酵母粉1.0g/L）濃度。
（2）通過單因素試驗(yàn)，系統(tǒng)研究溫度，pH，碳源，氮源，豆甾醇濃度對(duì)甾醇降解率的影響。利用Minitab軟件進(jìn)行了PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)，最陡爬坡試驗(yàn)和中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)（CCD），得出了最佳降解工藝組合溫度40℃，pH值為6.53，豆甾醇濃度為2.15g/L，葡萄糖濃度6g/L，酵母粉濃度1g/L。在此條件下進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，最終甾醇降解率的均值為97.28%，與預(yù)測值基本相符，因此經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化后的降解條件是可行的。
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